假黄皮中化学成分及其抑制滑膜成纤维细胞增殖活性研究（二）

化合物9 淡黄色无定形粉末，假黄及其究改良碘化铋钾显色反应阳性；C9H7NO,皮中 ESI-MS m/z 146 +；1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 9.92 (1H, s, 3-CHO), 8.27 (1H, s, H-2), 8.09 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-4), 7.51 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-7), 7.24 (1H, dd, J = 8.2, 7.6 Hz, H-5), 7.22 (1H, dd, J = 7.8, 7.6 Hz, H-6)；13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ: 185.0 (3-CHO), 138.6 (C-2), 137.1 (C-8), 124.1 (C-9), 123.4 (C-4), 122.1 (C-5), 120.8 (C-6), 118.1 (C-3), 112.6(C-7)。以上数据与文献报道的化学滑膜1H-indole-3-carboxaldehyde的波谱数据基本一致，故鉴定化合物9为1H-indole-3- carboxaldehyde 。成分成纤

化合物10 淡黄色无定形粉末，抑制改良碘化铋钾显色反应阳性；C15H11NO,维细 ESI-MS m/z 222 +；1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 10.82 (1H, s, NH), 8.27 (1H, s, H-4), 7.87 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-5), 7.72 (1H, br s, H-2'), 7.33 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-8), 7.20 (1H, dd, J = 8.0, 7.6 Hz, H-7), 7.03 (1H, dd, J = 7.8, 7.6 Hz, H-6), 6.86 (1H, br s, H-1'), 2.24 (3H, s, 3-CH3)；13C-NMR (DMSO-d6, 100 MHz) δ: 154.8 (C-2), 139.7 (C-1a), 139.4 (C-8a), 123.4 (C-7), 122.9 (C-4), 121.1 (C-5a), 121.1 (C-2'), 118.7 (C-5), 118.1 (C-6), 116.3 (C-3), 116.3 (C-4a), 114.8 (C-1), 110.3 (C-8), 96.0 (C-1'), 16.6 (3-CH3)。以上数据与文献中报道的胞增furostifoline的波谱数据基本一致，故鉴定化合物10为furostifoline。殖活

化合物11 淡黄色无定形粉末，性研改良碘化铋钾显色反应阳性；C14H13NO2，假黄及其究ESI-MS m/z 228 +；1H-NMR (DMSO-d6,皮中 400 MHz) δ: 8.04 (2H, overlapped, H-4, 5), 7.50 (4H, overlapped, H-1, 2, 7, 8), 7.25 (1H, dd, J = 7.8, 7.6 Hz, H-6), 4.84 (2H, s, 3-CH2OH), 4.12 (3H, s, N-OCH3)；13C-NMR (DMSO-d6, 100 MHz) δ: 163.2 (C-6), 161.5 (C-2), 155.6 (C-8a), 143.7 (C-4), 125.1 (C-5), 123.4 (C-4a), 112.8 (C-8), 112.2 (C-3), 97.8 (C-7), 91.2 (C-2′), 71.6 (C-3′), 29.5 (C-1′), 26.0 (C-4′), 24.3 (C-5′)。以上数据与文献中报道的化学滑膜clausenalansine E的波谱数据基本一致，故鉴定化合物11为clausenalansine E。成分成纤

化合物12 淡黄色无定形粉末，抑制改良碘化铋钾显色反应阳性；C13H9NO，维细ESI-MS m/z 196 +；1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 10.09 (1H, s, 3-CHO), 8.60 (1H, dd, J = 1.6 Hz H-4), 8.13 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5), 7.97 (1H, dd, J = 8.4, 1.6 Hz, H-2), 7.51 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-1), 7.49 (1H, dd, J = 8.2, 7.8 Hz, H-7), 7.48 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-8), 7.32 (1H, dd, J = 8.0, 7.8 Hz, H-6)；13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ: 192.1 (3-CHO), 143.5 (C-8a), 140.2 (C-1a), 129.3 (C-3), 127.5 (C-7), 127.1 (C-2), 124.2 (C-4a), 123.7 (C-5a), 123.4 (C-4), 120.9 (C-6), 120.9 (C-5), 111.3 (C-8), 111.1 (C-1)。以上数据与文献中报道的3-formylcarbazole的波谱数据基本一致，故鉴定化合物12为3-formylcarbazole。

化合物13 淡黄色无定形粉末，改良碘化铋钾显色反应阳性；C15H13NO3，ESI-MS m/z 256 +；1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 8.61 (1H, s, H-4), 7.99 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-5), 7.39 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-8), 7.36 (1H, dd, J = 8.0, 7.6 Hz, H-7), 7.26 (1H, dd, J = 8.2, 7.6 Hz, H-6), 6.79 (1H, s, H-1), 3.95 ( 3H, s, 2-OCH3), 3.80 (3H, s, 3-COOCH3)；13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ: 167.4 (3-COOCH3), 159.3 (C-2), 143.6 (C-1a), 140.1 (C-8a), 125.5 (C-7), 125.0 (C-4), 123.5 (C-5a), 120.4 (C-6), 119.9 (C-5), 116.5 (C-4a), 112.3 (C-3), 110.8 (C-8), 56.2 (3-COOCH3), 52.0 (2-OCH3)。以上数据与文献中报道的clausine L的波谱数据基本一致，故鉴定化合物13为clausine L。

化合物14 淡黄色无定型粉末，改良碘化铋钾显色反应阳性；C14H11NO3，ESI-MS m/z 242 +；1H-NMR (acetone-d6, 400 MHz) δ: 11.62 (1H, br s, NH), 8.29 (1H, d, J =1.8 Hz, H-4), 8.15 (1H, dd, J = 8.2 Hz, H-5), 7.53 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-8), 7.47 (1H, dd, J = 1.8 Hz, H-2), 7.40 (1H, dd, J = 8.2, 7.6 Hz, H-7), 7.18 (1H, dd, J = 8.0, 7.6 Hz, Hz, H-6)；13C-NMR (acetone-d6, 100 MHz) δ: 167.2 (3-COOCH3), 143.1 (C-1), 140.2 (C-8a), 132.9 (C-1a), 126.1 (C-7), 123.4 (C-5a), 123.0 (C-3), 120.7 (C-4a), 120.6 (C-5), 119.4 (C-6), 114.0 (C-4), 111.8 (C-8), 110.3 (C-2), 51.8 (3-COOCH3)。以上数据与文献中报道的clausine E的波谱数据基本一致，故鉴定化合物14为对clausine E。

化合物15 淡黄色无定型粉末，改良碘化铋钾显色反应阳性；C14H11NO2，ESI-MS m/z 226 +；1H-NMR (acetone-d6, 400 MHz) δ: 8.36 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-4), 8.17 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5), 7.58 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-2), 7.54 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-8), 7.43 (1H, dd, J = 8.2, 7.8 Hz, H-7), 7.22 (1H, dd, J = 8.0, 7.8 Hz, H-6), 3.86 (3H, s, 3-COOCH3)；13C-NMR (acetone-d6, 100 MHz) δ: 167.3 (3-COOCH3), 143.9 (C-1a), 140.2 (C-8a), 133.2 (C-2), 125.9 (C-7), 123.3 (C-4a) 123.1 (C-5a), 120.7 (C-4), 120.5 (C-3), 119.2 (C-5), 113.4 (C-6), 111.7 (C-8), 51.7 (3-COOCH3)。以上数据与文献中报道的methyl carbazole-3-carboxyaate的波谱数据基本一致，故鉴定化合物15为methyl carbazole-3-carboxyaate。

化合物16 淡黄色无定形粉末，改良碘化铋钾显色反应阳性；C14H11NO2，ESI-MS m/z 226 +；1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 10.49 (1H, s, 3-CHO), 8.56 (1H, s, H-4), 8.34 (1H, s, NH), 8.00 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-5), 7.38 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-8), 7.32 (1H, dd, J = 8.2, 7.6 Hz, H-7), 7.26 (1H, dd, J = 7.8, 7.6 Hz, H-6), 6.87 (1H, s, H-1), 3.99 (3H, s, 2-OCH3)；13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ: 189.7 (3-CHO), 161.8 (C-2), 145.1 (C-1a), 140.1 (C-8a), 125.9 (C-7), 123.9 (C-5a), 122.0 (C-4), 121.0 (C-6), 120.3 (C-5), 119.2 (C-3), 117.6 (C-4a), 110.8 (C-8), 92.6 (C-1), 56.0 (2-OCH3)。以上数据与文献中报道的glycosinin的波谱数据基本一致，故鉴定化合物16为glycosinin。

化合物17 淡黄色无定型粉末，改良碘化铋钾显色反应阳性；C14H13NO，ESI-MS m/z 212 +；1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 8.28 (1H, s, NH), 8.18 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5), 7.66 (1H, br s, H-4), 7.52 (1H, dd, J = 7.8, 7.6 Hz, H-7), 7.47 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-8), 7.36 (1H, dd, J = 8.0, 7.6 Hz, H-6), 6.85 (1H, s, H-1), 4.06 (3H, s, 1-OCH3), 2.68 (3H, s, 3-CH3)；13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ: 145.5 (C-1), 139.6 (C-8a), 129.6 (C-3), 128.1 (C-1a), 125.6 (C-7), 124.5 (C-4a), 123.7 (C-5a), 120.6 (C-5), 119.3 (C-6), 112.7 (C-4), 111.0 (C-8), 107.8 (C-2), 55.6 (1-OCH3), 22.1 (3-CH3)。以上数据与文献中报道的murrayafoline A的波谱数据基本一致，故鉴定化合物17为murrayafoline A。

化合物18 淡黄色无定形粉末，改良碘化铋钾显色反应阳性；C16H15NO4，ESI-MS m/z 286 +；1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 8.48 (1H, s, H-4), 8.30 (1H, s, NH), 7.84 (1H, d, J = 8.6 Hz, H-5), 6.89 (1H, s, H-1), 6.86 (1H, dd, J = 8.6, 2.2 Hz, H-6), 6.82 (1H, d, J = 2.2 Hz, H-8), 3.97 (3H, s, 2-OCH3), 3.94 (3H, s, 7-OCH3), 3.91 (3H, s, 3-COOCH3)；13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ: 167.3 (3-COOCH3), 158.9 (C-7), 158.6 (C-2), 143.6 (C-1a), 141.4 (C-8a), 124.0 (C-4), 120.6 (C-5), 117.3 (C-5a), 116.8 (C-4a), 112.4 (C-3), 108.8 (C-6), 95.4 (C-8), 93.9 (C-1), 56.4 (2-OCH3), 55.7 (3-COOCH3), 52.0 (7-OCH3)。以上数据与文献中报道的clausine H的波谱数据基本一致，故鉴定化合物18为clausine H。

化合物19 淡黄色无定形粉末，改良碘化铋钾显色反应阳性；C18H17NO3，ESI-MS m/z 296 +；1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 7.85 (1H, s, H-4), 7.74 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5), 6.88 1H, d, J = 2.0 Hz, H-8), 6.78 (1H, dd, J = 8.4, 2.0 Hz, H-6), 5.28 (1H, t, J = 6.8 Hz, H-2′), 3.57 (2H, d, J = 6.8 Hz, H-1′), 1.86 (3H, s, H-4′), 1.73 (3H, s, H-5′)；13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ: 195.5 (3-CHO), 157.3 (C-2), 156.0 (C-7), 145.4 (C-10), 141.9 (C-9), 134.0(C-3′), 123.9 (C-4), 121.4 (C-2′), 120.6 (C-5), 117.8 (C-11), 116.9 (C-12), 115.3 (C-3), 109.9 (C-6), 109.2 (C-l), 97.8 (C-8), 25.8 (C-5′), 23.0 (C-1′), 18.2 (C-4′)。以上数据与文献中报道的2, 7-dihydroxy-3-formyl-1-(3'-methyl-2'- butenyl)carbazole的波谱数据基本一致，故鉴定化合物19为2, 7-dihydroxy-3-formyl-1- (3'-methyl-2'-butenyl)carbazole。

4 抗类风湿性关节炎活性评价

以MH7A滑膜成纤维细胞株为抗类风湿性关节炎活性评价细胞株，以甲氨蝶呤为阳性对照药物，采用MTS法通过评价分离得到的19个已知化合物的体外抑制MH7A滑膜成纤维细胞增殖的活性对分离得到的化合物1～19的抗类风湿性关节炎活性进行了评价，详细的实验操作方法和操作流程见作者已经发表的研究论文。

抗类风湿性关节炎活性评价结果表明化合物10～19对MH7A滑膜成纤维细胞表现出了较为显著的生长抑制活性，它们对滑膜细胞增殖的抑制活性的IC50为(27.63±0.18)～(235.67±2.16) μmol·L-1，但化合物1～9未表现出明显的抑制滑膜细胞生长的活性(IC50＞300.00 μmol·L-1)。值得注意的是，化合物10～13、16和18表现出了优于阳性对照药物甲氨蝶呤对滑膜细胞的生长抑制活性，提示它们具有显著的体外抗类风湿性关节炎活性，见表1。

5 结果与讨论

本研究综合运用多种现代色谱分离方法和波谱鉴定技术对芸香科黄皮属植物假黄皮枝叶的90%乙醇提取物中的化学成分进行了系统研究，从中分离鉴定了19个化合物，其中化合物1～11为首次从假黄皮中分离得到，化合物1、2、10为首次从黄皮属植物中分离得到。通过对分离得到的化合物1～19的体外抑制MH7A滑膜成纤维细胞增殖活性评价发现了10个具有较为显著的抗类风湿性关节炎活性的化合物。本研究丰富了假黄皮作为抗类风湿性关节炎民间药用植物的药效物质基础，同时可为假黄皮植物资源的合理开发与利用提供重要的科学依据。

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