R.oryzaeMG1发酵对姜油树脂抗氧化活性的影响(二)
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2、酵对姜油姜油树脂添加量对R.oryzaeMG1生物量和发酵液pH的树脂影响
在20mLPDA液体培养基中分别添加姜油树脂0μL、100uL.200μL、抗氧400uL、化活800uL,影响接入1%的酵对姜油R.oryzaeMG1孢子悬液,28℃震荡(150/min)培养72h,树脂每8h取样,抗氧测定培养物pH及菌丝湿重,化活绘制的影响生长量曲线和pH曲线如图2、3所示。酵对姜油
由图2可见,树脂随着姜油树脂添加量的抗氧增加,R.oryzaeMG1生长速率及细胞量逐渐递减,化活说明姜油树脂有一定的影响抑菌作用。在不添加姜油树脂的情况下,R.oryzaeMG1在接种后16h进入对数期,且持续增长,72h后菌丝湿重8.72g;当姜油树脂添加量为50μL时,MG1生长趋势与不添加姜油树脂时相近,但生长速率稍缓,在接种后24h为对数期,细胞量有所降低,72h后菌丝湿重8.22g;当姜油树脂添加量为100uL时,生长速率明显缓慢,约32h后才进入对数期,72h后菌丝湿重降为3.71g;当姜油树脂添加量超过200μL时,MG1生长极缓慢,细胞量明显降低,72h后菌丝湿重小于1.70g。上述分析表明,在0~100μL姜油树脂添加量范围内,对R.oryzaeMG1的生长繁殖影响不大,当添加量超过100μL时,表现出极强的抑菌能力。
由图3可见,随着姜油树脂添加量的增加,培养物的pH持续上升;不添加姜油树脂的情况下,经72h发酵,pH为2.81;随姜油树脂添加量的梯度,pH分别为2.77、2.96、3.13、3.43、3.62。上述分析表明,在0~100μL姜油树脂添加量范围内,MG1的代谢未受到明显抑制,产酸能力较强,与图2的分析相吻合。
由图4可见,当液体培养基中不添加姜油树脂时,MG1生长状况良好,菌丝抱团,菌丝球大小均匀,培养液澄清;在姜油树脂添加量在50~200uL时,菌丝一部分抱团,另一部分呈絮状,培养液澄清;在姜油树脂添加量达到400~800uL时,菌丝完全呈絮状,培养液较混浊。说明R.oryzaeMG1对姜油树脂的耐受能力约在100uL以内,与图2、3的分析相吻合,而且絮状的菌丝形态更有利于产酶,以此为基础,进行后续姜油树脂添加量单因素试验。
3、R.oryzaeMG1发酵姜油树脂条件的单因素试验
(1)姜油树脂添加量对抗氧化活性的影响
在20mLPDA液体培养基中分别添加姜油树脂10μL、20μL、30μuL、40μuL、50μL、60uL、70μL、80μL、90μL、100μL、120μL、140μL、160uL、180μL、200μL,接入1%的MG1孢子悬液,35℃震荡(150r/min)培养4d后姜油树脂的抗氧化活性见图5。
由图5可见,在10~70μL姜油树脂添加量范围内,发酵后姜油树脂TAC逐渐增加,当姜油树脂添加量为70uL时,TAC为1964.67±6.09umol/g;当添加量大于70μL后,TAC逐渐降低,说明R.oryzaeMG1的生长受到抑制,生长代谢减缓,导致发酵后姜油树脂的总抗氧化活性降低。因此选取70μL姜油添加量进行后续试验。
(2)发酵温度对抗氧化活性的影响
在20mLPDA液体培养基中添加70μL姜油树脂,接种后在不同温度下震荡培养4d后姜油树脂的抗氧化活性见图6。
由图6可见,姜油树脂乳添加量为70uL,在20~35℃下发酵4d后,姜油树脂的TAC逐渐升高。当温度为35℃时,TAC为1980.13±8.60μmol/g;当温度高于35℃后,TAC逐渐降低,说明R.oryzaeMG1生长代谢受到影响,发酵力降低,导致发酵后姜油树脂的总抗氧化活性降低。因此发酵温度35℃进行后续试验。
(3)发酵时间对抗氧化活性的影响
在20mLPDA液体培养基中添加70uL姜油树脂,接种后35℃培养不同时间,每天取样测定抗氧化活性见图7。
如图7可见,姜油树脂乳添加量为70μL,在35℃下发酵1~4d后,姜油树脂的TAC逐渐增加,在发酵4d时,TAC为2003.9土5.45umol/g;当发酵时间超过4d后,TAC变化差异不显著,说明随MG1生长进入稳定期,发酵力趋于平稳,导致发酵后姜油树脂的总抗氧化活性与之前无显著性差异。因此,选择发酵时间4d进行后续试验。
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