HPLC法测定兰州拉面汤中核苷类成分含量的研究（二）

2.2.2 精密度试验

精密称取次黄嘌呤、法测黄嘌呤、定兰的研尿苷、州拉中核肌苷、面汤尿苷、苷类腺苷对照品各8mg，成分将次黄嘌呤用2％盐酸一水溶液溶解，含量将黄嘌呤用5％氨水溶解，法测其余对照品用20％甲醇-水溶液溶解，定兰的研分别定容于10mL容量瓶中，州拉中核分别取各对照品溶液1.0mL于同一10mL容量瓶中，面汤定容至刻度，苷类配制成80μg/mL的成分混合对照品储备液。将储备液配制成浓度分别为lμg/mL、含量5μg/mL、法测10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL的工作液即得40μg/mL混合对照品溶液。色谱柱：Acclail^TM120C₁₈色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)I流动相水(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0～3min，2％B；3～3.1min，2％B～3％B；3.1～6min，3％B；6.0～6.1min，3％B～4％B；6.1～9min；4％B～7％B；9.1—17min，7％B；17.1～20min，2％B)；流速1.0mL/minl检测波长260nm；柱温30℃；进样量5μL色谱条件进样，重复6次，测得次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷和腺苷对照品含量的RSD值分别为0.122％、0.295％、0.283％、0.22l％、0.108％、0.154％。结果表明，该仪器精密度良好。

2.2.3 重复性试验

取4号兰州拉面汤6份，按照色谱柱：Acclail^TM120C₁₈色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)I流动相水(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0～3min，2％B；3～3.1min，2％B～3％B；3.1～6min，3％B；6.0～6.1min，3％B～4％B；6.1～9min；4％B～7％B；9.1—17min，7％B；17.1～20min，2％B)；流速1.0mL/minl检测波长260nm；柱温30℃；进样量5μL色谱条件测定，测得兰州拉面汤中次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷和腺苷含量的RSD值分别为0.734％、3.076％、1.496％、0.591％、2.223％、1.707％。结果表明，该方法重复性良好。

2.2.4 稳定性试验

取1号兰州拉面汤样品，按照色谱柱：Acclail^TM120C₁₈色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)I流动相水(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0～3min，2％B；3～3.1min，2％B～3％B；3.1～6min，3％B；6.0～6.1min，3％B～4％B；6.1～9min；4％B～7％B；9.1—17min，7％B；17.1～20min，2％B)；流速1.0mL/minl检测波长260nm；柱温30℃；进样量5μL色谱条件测定，分别在0h、3h、6h、9h、12h测定，测得次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷和腺苷含量的RSD值分别为0.666％、1.607％、1.327％、0.663％、1.469％、2.010％。结果表明，供试品溶液在12h内稳定。

2.2.5 加标回收率试验

取1号兰州拉面汤，在添加量10μg/mL的水平下，测得次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷和腺苷回收率分别为95.61％、99.68％、99.19％、102.31％、97.92％、101.50％。RSD分别为1.536％、0.879％、0.949％、0.466％、0.972％、0.777％。

2.3 样品含量测定

分别取6个品牌兰州拉面汤样品各15份，按照取6种新熬制的兰州拉面汤，编号分别为l号、2号、3号、4号、5号、6号，对每个样品分别进行0h、1.5h、3h、4.5h和6h的熬煮，熬煮过程中在汤中慢慢加人少量水，保证熬煮过程中汤的浓度不变，将兰州拉面汤经0.22μm滤膜过滤，待上机测定。方法制备供试品溶液，按照色谱柱：Acclail^TM120C₁₈色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)I流动相水(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0～3min，2％B；3～3.1min，2％B～3％B；3.1～6min，3％B；6.0～6.1min，3％B～4％B；6.1～9min；4％B～7％B；9.1—17min，7％B；17.1～20min，2％B)；流速1.0mL/minl检测波长260nm；柱温30℃；进样量5μL的色谱条件进行测定，测得6种核苷成分在不同熬煮时间的平均含量及总含量，结果见表2～表7。

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