气质联用法对食品中甜蜜素检测的定性定量分析（一）

甜蜜素，气质学名环己基氨基磺酸钠，联用量分甜度比蔗糖高出40倍，法对是食品一种无营养甜味剂，较难被身体代谢。中甜我国针对食品中甜蜜素的蜜素添加使用，在GB2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中作出规定，检测冰冻饮品、性定析饼干、气质果冻、联用量分饮料类、法对复合调味料最大使用量为0.65g/kg，食品果酱、中甜蜜饯、蜜素腌制蔬菜最大使用量1.0g/kg，检测面包、糕点最大使用量1.6g/kg，带壳熟制坚果与籽类最大使用量6.0g/kg。目前市场上甜蜜素超标的问题，主要集中在饮料、蜜饯与糕点等食品上。

目前甜蜜素的检测方法有多种，如分光光度计法、气相色谱法、气质联用法、液相色谱法和液相色谱串联质谱联用法等。其中气相色谱法是比较常用的检测方法，但缺点是检出限较低，且容易出现检出假阳性问题。国标GB/T5009.97-2003采用的便是气相色谱法。原理是在酸性介质中，环己基氨基磺酸钠与亚硝酸钠反应生成环己醇亚硝酸酯，通过其色谱峰对甜蜜素进行定性定量。气相色谱法检出限相对较低，且很少提到第二种衍生产物，仅对其主要产物进行定性定量。随着对甜蜜素检测研究的深入，越来越多的实验者将第二种衍生物纳入定量范围。国标GB5009.97-2016第一法气相色谱法中，前处理方法原理不变，同时检测衍生产物环己醇亚硝酸酯类化合物和环己醇，加和定量。但是用气质联用方法对两种衍生产物加和定量的研究报道较少。基于此，本文在GB5009.97—016第一法的基础上，考察了气质联用法甜蜜素的定性和定量研究的可行性，有效排除了测定结果假阳性的可能性，与气相色谱法相比，同时降低了检出限。

一、试验部分

1、试剂与仪器

AgilengtGC-MSD（7890A-5975C）（美国安捷伦仪器公司），色谱柱：HP-5MS（30mx0.25mmx0.25um）﹔环己基氨基磺酸钠标准品（纯度99.8%），正已烷（HPLC级），亚硝酸钠、硫酸、氯化钠〈分析纯）。

2、实验过程

（1）色谱条件

色谱柱：HP-5MS（30m×0.25mm×0.25μm），载气：高纯氦气（≥99.999%）﹔柱流量（恒流）：1.5mL/min，进样口温度：250℃﹔进样方式：分流进样，进样量：1μL，程序升温：初温40℃，保留4min，4℃/min升至80℃/min，保留0min，30℃/min升至190℃/min，保留4min。

（2）质谱条件

离子源温度230℃，接口温度280℃﹔离子源类型EI，电离能量70eV，扫描方式：选择离子扫描；溶剂延迟时间为7.00min。

（3）试验方法

样品前处理：称取打碎、混匀的样品5g于50mL离心管中，加30mL水，振摇，超生远取20min，混匀，离心（3000r/min）10min，过滤，用水分次洗涤残渣，收集滤液并定容至50mL。高脂高蛋白样品暂不在研究范围内。

衍生和测定：准确移取上述试样溶液10.0mL于50mL带盖离心管中，冰浴5min后，准确加入5.00mL正己烷，加入2.5mL亚硝酸钠溶液（50g/L），2.5mL硫酸溶液（200g/L），旋紧离心管盖，在冰浴中放置30min，其间振摇3～5次﹔加入2.5g氯化钠，盖上盖后置旋涡混合器上振动1min，低温静置或离心，至澄清后取上清液1mL过0.45um滤膜后进样。

二、结果与讨论

1、目标物定性条件分析

通常认为甜蜜素衍生产物只有1个，为环己醇亚硝酸酯，在国标GB5009.97—2003中也仅以环己醇亚硝酸酯来进行定量。本研究中发现甜蜜素衍生得到两个产物（图1），峰1保留时间8.100min，峰2保留时间8.770min，与部分文献报道相同。产物1（峰1）是主要产物，通常认为是环己醇亚硝酸酯，但在NIST08中发现两者匹配度很低，为何种物质尚有待分析。产物2（峰2）通过在NIST08中进行匹配，推断为环己醇，且与环已醇标样对比得到验证。产物1定性离子：41、55、83，产物2定性例子：57、67、82。

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