UPLC法测定芭蕉药材不同部位中羽扇豆酮和豆甾醇的含量（一）

芭蕉根为芭蕉科植物芭蕉Musa basjoo Sied.et Zucc.的法测干燥根茎，是定芭豆酮的含贵州苗族地区习用苗药，收载于2003年版《贵州省中药材、蕉药民族药材质量标准》，同部具有清热解毒、位中止渴利尿的羽扇功效。现代研究发现，和豆芭蕉根具有抑制α-葡萄糖苷酶、甾醇抗炎镇痛等药理活性。法测芭蕉根中含有多糖类、定芭豆酮的含皂苷类、蕉药黄酮类、同部香豆素类、位中蒽醌类、羽扇酚类、和豆强心苷等化学成。

其中，五环三萜类成分羽扇豆酮具有降血糖、抗炎以及改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的作用；甾体类成分豆甾醇具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、降低胆固醇等药理作用。芭蕉根中的活性成分羽扇豆酮和豆甾醇主要是由其根茎部位分离提取而得，但芭蕉根茎被采挖后，植株便不可再生，而其地上部位的茎和叶多被丢弃，不仅污染环境，还造成了资源浪费。因此，探究芭蕉茎和叶能否替代根茎作为羽扇豆酮和豆甾醇的原药材来源，既有利于保护药材资源，又可以减轻环境污染。基于此，本研究采用超高效液相色谱（UPLC）法检测同植株芭蕉根茎、茎和叶中羽扇豆酮和豆甾醇的含量，并进行组间比较分析、主成分分析和聚类分析，以期为芭蕉的茎、叶能否替代其根茎作为羽扇豆酮和豆甾醇的原药材来源提供依据。

1 材料

1.1 主要仪器

本研究所使用的的主要仪器有：Waters ACQUITY型UPLC仪、光电二极管矩阵（PDA）检测器（美国Waters公司），AL204-IC型分析天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]，DZF-0型真空干燥箱（上海贺德实验设备有限公司），HH-6型数显恒温水浴锅（常州澳华仪器有限公司），HS-10260T型超声波清洗仪（天津市恒奥科技发展有限公司）。

1.2 主要试剂

本研究所使用的主要试剂有：羽扇豆酮对照品（贵州中医药大学药物分析实验室自制，纯度≥98%），豆甾醇对照品（成都瑞芬思生物科技有限公司，批号D-042-161216，纯度≥98%），甲醇、乙腈（德国Merck公司，均为色谱纯）；水为屈臣氏蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

1.3 药材

本课题组在贵州、福建两地采挖了9批芭蕉药材，经贵州民族大学民族医药学院王祥培教授鉴定均为芭蕉科植物芭蕉M.basjoo Sied.et Zucc.。分别取其根茎、茎和叶，切碎、晒干、打粉、过四号筛、密封，得27份样本（编号及来源见表1，表中(1)(2)表示同一来源不同批次药材）；将样本置于阴凉干燥处保存，备用。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Zorbax Rrhd Eclipse Plus C18(100 mm×2.1mm,1.8μm），流动相为乙腈-甲醇（78.5∶21.5,V/V），检测波长为210 nm，流速为0.15 m L/min，柱温为30℃，进样量为1μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 供试品溶液

取芭蕉的根茎、茎和叶粉末各约1.0 g，精密称定，分别置于锥形瓶中，加入50 m L甲醇，超声（功率260 W，频率40 k Hz）提取2次，每次30 min；用滤纸滤过，合并2次滤液，置于蒸发皿中，水浴加热挥干后，残渣用甲醇溶解并转移至10 m L量瓶中，加入甲醇定容，摇匀，经0.22μm微孔滤膜滤过，备用。

2.2.2 混合对照品溶液

取羽扇豆酮和豆甾醇对照品各适量，精密称定，置于10 m L量瓶中，加入甲醇定容，摇匀，配制成质量浓度分别为598、461µg/m L的混合对照品母液；取混合对照品母液适量，加入甲醇稀释，配制成每1 m L含羽扇豆酮119.6µg、豆甾醇92.2µg的混合对照品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 系统适用性试验

取上述混合对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液（即甲醇）各适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，详见图1。由图1可知，芭蕉根茎、茎、叶中羽扇豆酮和谷甾醇与各自相邻色谱峰的分离度均大于1.5，理论板数均大于6 000，且阴性对照无干扰。

2.3.2 线性关系考察

精密吸取“2.2.2”项下混合对照品母液适量，以甲醇稀释并制成羽扇豆酮质量浓度分别为11.16、22.32、38.72、89.26、178.50、357.10µg/m L和豆甾醇质量浓度分别为8.83、13.64、27.28、54.56、109.20、160.40µg/m L的系列混合对照品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以峰面积（y）为纵坐标、对照品质量浓度（x）为横坐标，进行线性回归，结果见表2。

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